1 與氣相色譜相比液相色譜的優(yōu)點：液相色譜法不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性及相對分子質(zhì)量的限制，只要求把樣品制成溶液即可，非常適合于分離生物大分子、離子型化合物，不穩(wěn)定的天然產(chǎn)物以及其他各種高分子化合物等。此外，液相色譜的流動相不僅起到使樣品沿色譜柱移動的作用，而且與固定相一樣，與樣品分子發(fā)生選擇性的相互作用，這就為控制和改善分離條件提供了一個額外的可變因素。而氣相色譜法采用的流動相是惰性氣體，對組分沒有親和力，僅起運載作用。

2 流動相使用前必須脫氣。常用的脫氣方法有：低壓脫氣法（電磁攪拌、水泵抽空，可同時加熱或向溶劑吹氮氣）、吹氦氣脫氣法和超聲波脫氣法等。

3 梯度洗脫：用兩種（或多種）不同極性的溶劑，在分離過程中按一定程序連續(xù)改變流動相中溶劑的配比和極性，通過流動相中極性的變化來改變被分離組分的分離因素，以提高分離效果。

4 高壓梯度（內(nèi)梯度）：特點是先加壓后混合。將溶劑用高壓泵增壓以后輸入色譜系統(tǒng)的梯度混合室，加以混合后送入色譜柱。低壓梯度（外梯度）：特點是先混合后加壓。在常壓下預(yù)先按一定的程序?qū)⑷軇┗旌虾笤儆帽幂斎肷V柱。

5 進樣系統(tǒng)要求：良好的密封性，最小的死體積，最好的穩(wěn)定性，進樣時對色譜系統(tǒng)壓力、流量影響較小。

6 分離系統(tǒng)：色譜柱是實現(xiàn)分離的核心部件。由柱管和固定相組成。柱管為直型不銹鋼管。一般色譜柱長5~30 cm，內(nèi)徑4~5 mm，凝膠色譜柱內(nèi)徑3~12 mm，而制備色譜柱內(nèi)徑則可達25 mm。一般淋洗溶劑在進入色譜分離柱之前，先通過前置柱。HPLC柱的填料顆粒粒徑一般約為3~10 ?m，填充常采用勻漿法。色譜柱的發(fā)展趨勢是減小填料粒度和柱徑以提高柱效。

7 檢測系統(tǒng)：作用——用來連續(xù)監(jiān)測經(jīng)色譜柱分離后的流出物的組成和含量變化的裝置。紫外-可見吸收檢測器、光電二極管陣列檢測器、示差折光檢測器、熒光檢測器、電化學(xué)檢測器。

8 高效液相色譜法對流動相的要求：流動相不與色譜柱發(fā)生不可逆化學(xué)變化，以保持柱效或柱子的保留性質(zhì)較長時間不變；對待測樣品有足夠的溶解能力；與所用檢測器相匹配；粘度盡可能小，以獲得較高的柱效；流動相純度要高，價格便宜，毒性小。

9 離子交換色譜法原理：離子交換色譜法的固定相是離子交換樹脂，流動相是水溶液，它是利用待測樣品中各組分離子與離子交換樹脂的親和力的不同而進行分離的。

10 離子交換色譜法流動相：水的緩沖溶液。陰離子離子交換樹脂作固定相，采用酸性水溶液；陽離子離子交換樹脂作固定相，采用堿性水溶液；應(yīng)用：離子及可離解的化合物，氨基酸、核酸等。

11 凝膠色譜法流動相：能溶解樣品且與凝膠相似(潤濕凝膠并防止吸附作用)、粘度小(增加擴散速度)。常用四氫呋喃、苯、氯仿、水等。

12 影響分離的因素與提高柱效的途徑:

（1）液體的黏度比氣體大一百倍，密度為氣體的一千倍左右，故降低傳質(zhì)阻力是提高柱效主要途徑。

（2）由速率方程，降低固定相粒度可提高柱效。

（3）液相色譜中，不可能通過增加柱溫來改善傳質(zhì)。

（4）恒溫改變淋洗液組成、極性是改善分離的最直接的因素。

（5）流速大于0.5 cm/s時, H～u曲線是一段斜率不大的直線。降低流速，柱效提高不是很大。但在實際操作中，流量仍是一個調(diào)整分離度和出峰時間的重要可選擇參數(shù)。

（6）氣相色譜中的固定液原則上都可以用于液相色譜，其選用原則與氣相色譜一樣。但在高效液相色譜中，分離柱的制備是一項技術(shù)要求非常高的工作，一般很少自行制備。

---本文摘自實驗與分析