1.色譜純、分析純、化學(xué)純之間的區(qū)別
色譜純?cè)噭┦侵高M(jìn)行色譜分析時(shí)使用的標(biāo)準(zhǔn)試劑，在色譜條件下只出現(xiàn)指定化合物的峰，不出現(xiàn)雜質(zhì)峰。化學(xué)純?cè)噭┦侵敢话慊瘜W(xué)試驗(yàn)用的試劑，有較少的雜質(zhì)，不妨您的實(shí)驗(yàn)要求。分析純是指做分析測(cè)定用的試劑，雜質(zhì)更少，不妨礙分析測(cè)定。 色譜純、分析純、化學(xué)純,是指試劑的純度級(jí)別,三種試劑所使用的標(biāo)簽也有所不同：化學(xué)純?cè)噭?biāo)簽為蘭色,分析純?cè)噭?biāo)簽為紅色,色譜純?cè)噭?biāo)簽為綠色.。對(duì)于化學(xué)純，分析純，優(yōu)級(jí)純，不同的藥品要求不一樣。

2.什么是色譜法

是一種利用混合物中諸組分在兩相間的分配原理以獲得分離的方法。色譜法利用不同物質(zhì)在不同相態(tài)的選擇性分配，以固定相對(duì)流動(dòng)相中的混合物進(jìn)行洗脫，混合物中不同的物質(zhì)會(huì)以不同的速度沿固定相移動(dòng)，最終達(dá)到分離的效果。色譜法起源于20世紀(jì)初，1950年代之后飛速發(fā)展，并發(fā)展出一個(gè)獨(dú)立的三級(jí)學(xué)科-色譜學(xué)。歷史上曾經(jīng)先后有兩位化學(xué)家因?yàn)樵谏V領(lǐng)域的突出貢獻(xiàn)而獲得諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)，此外色譜分析方法還在12項(xiàng)獲得諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)的研究工作中起到關(guān)鍵作用。

3.什么叫高效液相色譜法
高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）又稱(chēng)“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“高分離度液相色譜”、“近代柱色譜”等。高效液相色譜是色譜法的一個(gè)重要分支，以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析。該方法已成為化學(xué)、醫(yī)學(xué)、工業(yè)、農(nóng)學(xué)、商檢和法檢等學(xué)科領(lǐng)域中重要的分離分析技術(shù)

4.高效液相色譜和氣相色譜的異同點(diǎn)

不同點(diǎn)：

一、流動(dòng)相不同：HPLC為液體流動(dòng)相，GC為永久性氣體作流動(dòng)相（通常叫做載氣）

二、進(jìn)樣器不同：高效液相為平頭進(jìn)樣針，氣相色譜為尖頭進(jìn)樣針

三、色譜柱長(zhǎng)不同：

（1）氣相色譜柱通常幾米到幾十米

（氣相色譜由于載氣的相對(duì)分析量較低，分子間隙大，故粘度低，流動(dòng)性好，組分在氣相中流動(dòng)速度快，因此可以增加柱長(zhǎng)，以提高柱效）。

（2）液相色譜柱通常為幾十到幾百毫米

四、分析種類(lèi)有差異：

氣相色譜分析的對(duì)象多為（不適絕對(duì)）：分子質(zhì)量小于1000，低沸點(diǎn)，易揮發(fā)，熱穩(wěn)定性好的化合物。

液相色譜：更適用于分析高沸點(diǎn)，難揮發(fā)，熱穩(wěn)定性差，分子質(zhì)量較大（1000 - -2000）的液體化合物。

五、樣品柱前變化不同：氣相色譜的樣品在柱前必須變?yōu)闅怏w（氣化室汽化），而液相色譜的樣品在柱前則無(wú)變化。

六、所用檢測(cè)器有差異：

液相主要為：紫外檢測(cè)器，熒光檢測(cè)器、示差折光檢測(cè)器.....

氣相色譜主要為：氫火焰離子化檢測(cè)器（FID）,熱導(dǎo)檢測(cè)器（TCD）,電子捕獲檢測(cè)器（ECD）,火焰光度檢測(cè)器（FPD）,氮磷檢測(cè)器（NPD）相同點(diǎn)：基本原理相同。

都是利用物質(zhì)在流動(dòng)相和固定相中的分配系數(shù)的差別，從而在兩相間反復(fù)多次（1000-1000000次，甚至更多）的分配，使原來(lái)分配系數(shù)差別很小的各組分分離開(kāi)來(lái)。

5. 做高效液相色譜時(shí)應(yīng)注意哪些問(wèn)題

1、色譜柱中的流動(dòng)相是否會(huì)會(huì)排干的問(wèn)題：

不少做色譜分離試驗(yàn)的人遇到過(guò)這樣的情形：不慎未及時(shí)補(bǔ)充流動(dòng)相，泵將溶劑瓶中的流動(dòng)相吸干了，HPLC系統(tǒng)由此而停止工作了。如此情況是否會(huì)損壞色譜柱？泵是否已將色譜柱中所有流動(dòng)相都排干了？色譜柱還能使用嗎？事實(shí)上，如果泵將溶劑瓶中的流動(dòng)相吸干，并不會(huì)造成色譜柱的損壞。即使泵中充滿了空氣，泵也不會(huì)將空氣排入色譜柱。因?yàn)楸弥荒茌斔鸵后w，而不能輸送空氣。

2、色譜柱變干的問(wèn)題：

另一個(gè)更可能發(fā)生的情況是忘記蓋上色譜柱兩端的密封蓋或蓋子太松而使色譜柱變干。同樣，整個(gè)色譜柱干涸的情況不太容易發(fā)生，多半可能只是色譜柱兩端的幾個(gè)毫米變干了，因揮發(fā)掉所有溶劑是色譜柱變干需要相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間。即使色譜柱真的變干了，也不一定就不可救藥了。可以嘗試用一種完全脫氣的、表面張力低的溶劑（如經(jīng)氦氣脫氣的甲醇）沖洗色譜柱以除去氣體。較低的表面張力有助于浸潤(rùn)填料表面；已脫氣的溶劑應(yīng)該能夠溶解并去除滯留在填料中的氣體。色譜柱大約需要（以1mL/min的流速）沖一個(gè)小時(shí)或更多的時(shí)間被徹底浸潤(rùn)，恢復(fù)到正常狀態(tài)。

3、使用PEEK（polyetheretherketone）管路和接頭需要注意以下問(wèn)題：

如果經(jīng)常需要改變流路或更換不同品牌的色譜柱，使用PEEK材料制成的管路和接頭會(huì)非常方便。PEEK管路容易連接；PEEK接頭不僅無(wú)需工具，手?jǐn)Q即可固定，而且容易調(diào)節(jié)錐箍之外的管路長(zhǎng)度，方便與不同品牌或規(guī)格的色譜柱相連接。

使用此類(lèi)材料的管路需要注意的是：PEEK對(duì)鹵代烷烴和四氫呋喃的兼容性不好。雖然未觀察到上述溶劑溶解PEEK材料的明顯跡象，但PEEK遇到上述溶劑會(huì)變脆。另一個(gè)西藥考慮的因素是壓力限。不銹鋼管可耐受6000psi的壓力，但PEEK管只能耐受近4000psi（但多數(shù)HPLC應(yīng)用系統(tǒng)壓力不會(huì)超過(guò)3000psi）。

使用PEEK接頭時(shí)則無(wú)需擔(dān)心接頭耐溶劑性能，因?yàn)榻宇^幾乎或很少與溶劑直接接觸。但手?jǐn)Q固定的PEEK接頭壓力限低于不銹鋼管，因而壓力太高時(shí)，可能會(huì)使接頭在管路上滑動(dòng)而產(chǎn)生死體積或漏液。

4、預(yù)防液相泵的故障：

處于良好操作狀態(tài)的泵，應(yīng)該能使色譜圖上的基線平穩(wěn)；保留時(shí)間的重復(fù)性好。在等度洗脫時(shí)壓力波動(dòng)小于2%。梯度洗脫時(shí)壓力變化應(yīng)是緩慢和平穩(wěn)的。要保持泵的良好操作性能,必須維護(hù)系統(tǒng)的清潔,保證溶劑和試劑的質(zhì)量,對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行過(guò)濾和脫氣.下面列出預(yù)防泵故障的幾項(xiàng)措施：

 1）用高質(zhì)量試劑和HPLC級(jí)溶劑；

 2）過(guò)濾流動(dòng)相和溶劑；

 3）脫氣；

 4）每天開(kāi)始使用時(shí)放空排氣，工作結(jié)束后從泵中洗去緩沖液；

 5）不讓水或腐蝕性溶劑滯留泵中；

 6）定期更換墊圈；

 7）需要時(shí)加潤(rùn)滑油；

 8）查閱有關(guān)泵操作手冊(cè)中的其它建議。

 9）為了使故障發(fā)生后盡快排除，平時(shí)應(yīng)常備密封、單向閥（入口與出口）、泵頭裝置、各式接頭、保險(xiǎn)絲等部件，以及更換工具。

6.正相色譜法

正相色譜法（normal phase chromatography)固定相極性大于流動(dòng)相極性的分配色譜法稱(chēng)為正相分配色譜法，簡(jiǎn)稱(chēng)為正相色譜法。氰基鍵合硅膠、氨基鍵合硅膠等極性的化學(xué)鍵合固定相是正相色譜常用的固定相，正相色譜的流動(dòng)相一般為極性較小的有機(jī)溶劑。在正相色譜中，極性小的組分由于K值較小先流出，極性較大的組分后流出。正相色譜法用于溶于有機(jī)溶劑的極性及中等極性的分子型物質(zhì)的分離

7反相色譜法

反相色譜法（reversed phase chromatography）流動(dòng)相極性大于固定相極性的分配色譜法稱(chēng)為反相分配色譜法，簡(jiǎn)稱(chēng)為反相色譜法。反相色譜法使用非極性固定相，最常用的非極性固定相是十八烷基硅烷鍵合硅膠，還有辛烷基硅烷鍵合硅膠等。流動(dòng)相常用水與甲醇、乙腈或四氫呋喃的混合溶劑。在反相色譜中極大的組分因K值較小先流出色譜柱，極性較小的組分后流出。流動(dòng)相中有機(jī)溶劑的比例增加，流動(dòng)相極性減小，洗脫力增強(qiáng)。反相色譜法是目前應(yīng)用最廣的高效液相色譜法。

8.梯度洗脫的優(yōu)點(diǎn)
梯度洗脫的優(yōu)點(diǎn)：1.縮短分析周期；2.提高分離能力；3.峰型得到改善，很少拖尾；4.增加靈敏度。但有時(shí)引起基線漂移。