HPLC以它定量分析結果準確、分析周期短、分析范圍廣及分析檢測限低等優勢，在食品添加劑、藥物成分分析等多領域得到了廣泛的應用。本文就液相色譜儀在實際操作時應注意的事項及維護做了簡單介紹。

主要部件介紹：1.輸液系統，主要包括在線脫氣裝置、高壓輸液泵、梯度洗脫裝置。在線脫氣裝置主要功能是流動相在進入柱子前排除氣泡。高效液相色譜柱的填料顆粒小，通過 2~5 mm 的色譜柱受到的流動阻力很大，因此需要通過高壓輸液泵抽取流動相輸送至色譜柱。2. 高壓泵按輸液性能可分為恒壓、恒流泵。按機械結構可分為：液壓隔膜泵、氣動放大泵、螺旋注射泵和往復柱塞泵。3. 進樣器，它是將分析樣品送入色譜柱的裝置，分為手動、自動進樣器兩種。手動進樣器一般配有20~100μL的定量環。4.色譜柱，以液體為流動相，以廣義的固相為固定相來進行分析樣品的分離工作。色譜柱按照分離模式大致可以分為正相色譜柱和反相色譜柱。5.檢測器，將色譜柱分離出樣品的物理或化學特性轉換為可以測量的電信號，通過色譜圖記錄下來，由色譜圖中的峰形狀判斷分離效果，依據標物、分析樣色譜圖的出峰時間、峰面積分別對樣品進行定性定量分析。

維護及使用注意事項：1. 開關機操作注意，分析準備工作做好后，依次打開穩壓電源、高壓輸液泵、柱溫箱、檢測器，待各部件自檢結束，打開連接儀器的電腦，啟動工作軟件。分析工作結束后，關閉工作軟件，再依次關閉檢測器、柱溫箱和高壓輸液泵。2. 對流動相的要求，為保證液相色譜儀器的正常使用，所有流動相必須是色譜級的，且經過過濾雜質、排除氣泡后裝入干凈的流動相貯存瓶中待用。（1）流動相的物理化學性能要求，對分析物要有足夠的溶解能力，以利于提高檢驗的靈敏度；流動相的黏度要小，以保證合適的柱降壓；流動相的沸點要低，以利于制備分離時樣品的回收；流動相的pH值一般應在2~7.5；使用期限不得超過2天，否則產生細菌污染管路。（2）流動相的過濾，流動相在使用前都必須經過濾，以除去雜質微粒。同時要定期清洗吸濾頭，以防雜質通過其進入流動相。應依據其是否是水溶性選擇水膜或有機膜（0.45μm或0.22μm），使用溶劑過濾裝置，通過真空泵抽氣過濾。（3）流動相的脫氣，流動相必須預先脫氣，否則易產生氣泡，影響泵的工作。此外，溶解在流動相中的氧能與某些有機溶劑形成有紫外吸收的絡合物，提高背景吸收，會在梯度洗脫時造成基線漂移或形成鬼峰。常有的脫氣方法有在線真空脫氣法、超聲波脫氣法、抽真空脫氣法三種。3. 色譜柱的維護及使用注意事項，所有分析樣品最好把 PH 值調節到適合色譜柱的 PH 值范圍內。進樣要避免超負荷，這是保持色譜柱性能持久良好的重要方法之一。手動進樣器進樣的話，進樣時動作要快速準確。分析物成分復雜時，要在色譜柱前加色譜保護柱以保護色譜柱。每次分析工作開始時，要對色譜柱進行平衡，用含 10% 流動相中的有機溶劑的水溶液進行排氣和沖洗色譜柱和管路，沖洗 30 分鐘左右，將色譜柱中的純有機溶劑替換掉，然后再用至少 10 倍柱體積的流動相平衡色譜柱，直至基線平衡后方可進樣。每次分析工作結束后，一定要立即用一定量的水溶液徹底沖洗色譜柱中的緩沖鹽液，再用對被測物洗脫能力強的溶劑來沖洗色譜柱，沖洗時間不能小于 1 小時，洗脫溶劑的用量至少為柱體積的 20 倍。若不及時沖洗色譜柱，雜質長時間積累在其中，易堵塞色譜柱，降低柱效性能。長期這樣，會加速減少色譜柱使用壽命。色譜柱 4 天以上不使用，應從儀器上取下，用封頭螺帽把兩頭緊緊密封。色譜柱保存時注意不要強烈震動、碰撞。4. 高壓輸液泵的維護及使用注意事項，每次分析工作結束后，都應及時清洗泵。當有緩沖鹽做流動相時，緩沖鹽與有機溶劑互相交換前一定要用5%的甲醇水溶液清洗泵，防止鹽在有機相中結晶損壞泵中各組件。緩沖鹽溶液的濃度不要過高，要控制在5%以下，否則高濃度的緩沖鹽會磨損密封墊和活塞，降低其使用壽命。長時間使用高濃度的緩沖鹽，必須用10%的異丙醇色譜級溶液清洗泵，從而保護柱塞和密封墊。輸液泵工作前要設置工作壓力范圍，正常工作壓力一般不要超過30Mpa，否則經常高壓會使密封環變形，產生漏液。平時分析工作要養成記錄壓力的好習慣，這樣如果工作壓力超過平時正常壓力的10%~15%，就應及時查找原因。5. 紫外檢測器的維護及使用注意事項，紫外檢測器有一定的使用壽命，所以平時應盡量減少氘燈的使用時間，在柱平衡進行一大半之后，在走基線之前，打開檢測器光源；分析結束后即可關閉檢測器光源。要保持檢測器四周環境清潔，實驗室盡量少開窗戶，定期地面進行吸塵工作，防止檢測器工作時由于靜電吸附灰塵顆粒覆蓋在光學元件上。檢測器池內存在氣泡就會產生噪音，噪音會干擾定量分析，所以流動相須充分脫氣后再使用。應定期清洗流通池。如觀察到流通池內部無氣泡或臟物，應清洗流通池。通過注射器用異丙醇等有機溶劑沖洗池內，以清洗透鏡。如是含有緩沖鹽的溶劑作流動相，應在使用異丙醇沖洗前用水替換池中原先有的溶劑。

---本文摘自《實驗與分析》